Diagnosis of viroses in black pepper based on molecular methods.

Summary: A pimenta-do-reino (Piper nigrum L.) é amplamente comercializada como condimento alimentar, sendo a principal especiaria comercializada no mundo. No Brasil, os maiores estados produtores de pimenta-do-reino são o Pará e o Espírito Santo, representando um produto de grande importância para a economia capixaba. A produção estadual está concentrada na região norte, município de São Mateus, considerada um polo de produção desta cultura onde há condições de clima e solo favoráveis ao cultivo. No entanto, a sua produtividade e longevidade vêm decaindo ao logo do tempo, especialmente em decorrência da fusariose e de viroses que incidem sobre a cultura. Como a pimenta-do-reino é propagada vegetativamente, a disseminação de doenças viróticas se torna um problema ainda mais grave. No Brasil, já foram relatados os vírus Cucumber mosaic virus (CMV) e Piper yellow mottle virus (PYMoV) causando doenças e afetando lavouras. Na tentativa de auxiliar os pipericultores na detecção precoce destas viroses, o objetivo deste projeto é adaptar metodologias de rotina de laboratório que possibilitem isolar e caracterizar, por meio de análises moleculares, os vírus CMV e PYMoV que incidem sobre esta cultura. Inicialmente serão visitadas lavouras comercias na região de São Mateus para identificação de plantas que apresentem os sintomas, de um ou de ambos os vírus. Para padronização das técnicas, amostras vegetais de plantas sintomáticas e assintomáticas serão levadas ao laboratório para a realização das análises. Para o diagnóstico de CMV, cujo genoma é constituído por partículas de RNA, serão realizadas extrações de RNA total de folhas seguida da realização de duas técnicas: a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para detecção de fragmentos correspondentes aos das partículas dos RNAs genômicos do vírus e a técnica de RT-PCR usando primers específicos para amplificação de fragmentos de um gene que codifica proteína do capsídeo viral. Para o diagnóstico de PYMoV, cujo genoma é constituído por DNA, serão realizadas extrações de DNA de folhas seguida da realização da técnica de PCR usando primers específicos para amplificação de fragmentos do genoma viral. Para garantir segurança dos resultados, os produtos inicialmente amplificados para CMV e PYMoV serão enviados para seqüenciamento de DNA para se obter amostras controle positivo confiáveis. Para validação das técnicas moleculares estabelecidas para a detecção dos dois vírus, as mesmas serão testadas em amostras obtidas de matrizes e mudas de viveiros comerciais da região de São Mateus. Ao final do trabalho pretende-se disponibilizar um método biotecnológico alternativo para diagnosticar, de forma precoce, a presença dessas viroses na pimenta-do-reino, contribuindo para a adoção de políticas públicas que visam o controle da sua disseminação em lavouras do estado.

Starting date: 01/01/2017
Deadline (months): 48

Participants:

Role	Name
Coordinator *	ANDREIA BARCELOS PASSOS LIMA GONTIJO
Researcher *	TAÍS CRISTINA BASTOS SOARES
Researcher *	MARCELO BARRETO DA SILVA